Солянокислый гематин в дне эрозий и язв желудка
Гастроскопия это метод осмотра состояния верхних отделов желудочно-кишечного тракта со стороны слизистой, изнутри. Осматривается состояние слизистой пищевода, желудка, двенадцатиперстной кишки.
Процедура не самая простая и, конечно же, не самая приятная, точнее совсем не приятная. Но потерпеть можно, тем более, что она в принципе безболезненная и длится достаточно быстро – 1,5 – 2 минуты. Современное эндоскопическое оборудование позволяет сделать это быстро и качественно, а видео информация в HD качестве позволяет воспроизвести картинку повторно и пересмотреть результат.
Из патологии, которую можно выявить во время гастроскопии отметим наиболее важную, это дефекты слизистой – эрозии и язвы. Возникают они вследствие воздействия на слизистую ряда агрессивных факторов и вследствие не возможности собственных защитных факторов оградить или восстановить слизистую. К агрессивным относятся погрешности в диете, плохие напитки, табакокурение, нервные и прочие стрессы, лекарственные препараты, наследственные и хронические заболевания, Хеликобактер пилори и множественные прочие агенты. А защитных не так и много, это репаративная способность слизистой, способность вырабатывать слизь, какая-то роль иммунной системы и местного иммунитета.
Язвы представляют собой глубокие дефекты слизистой, грубо говоря, раны, повреждающие все слои стенки желудка или кишечника, вплоть до сквозного отверстия, что называется прободением или перфорацией. Эрозии это не такие глубокие повреждения и, как правило, ограничены верхним, эпителиальным слоем. По размерам и язвы и эрозии могут быть не большими, до 5 мм, и большего размера, и 10, и 15, и более мм. По Форме и язвы и эрозии чаще бывают округлыми или овальными, но могут быть и неправильной формы и фрагментированные, щелевидные, треугольные и пр. В зависимости от длительности существования по краю язв может формироваться вал инфильтрации, а на поверхности язвы образуется пленка бело-серого фибрина. Раны на коже тоже образуют аналогичную пленку, но поскольку она подсыхает, то образуется корочка – струп. На слизистых где постоянно влажная среда, фибрин не высыхает, постоянно редуцируется, поэтому и остается всегда серо-белым.
Вот тут мы и подошли к основной теме статьи, это включения на поверхности язв и эрозий покрытых фибрином. Очень часто эндоскописты описывая дефекты слизистой указывают на наличие включений гемосидерина на поверхности язвы или эрозии. Дотошный доктор еще опишет какого они цвета – и всегда красного или черного, иногда опишет размер 1-2-3 мм. Давайте разбираться.
В чем различия гемосидерина и гематина
Да, и на слизистой и тем более на язвах и на эрозиях могут появляться геморрагии – кровотечения, все же это раны, а раны могут кровоточить. Оборони создатель от активного массивного кровотечения и эндоскописта, оказывающего помощь, и пациента, потому что это очень опасное и тревожное состояние и называется оно кровотечением в просвет желудочно-кишечного тракта. Чаще кровотечение не активное, капиллярное, в виде кровоподтеков или тех самых включений на поверхности фибрина. И выглядит это в виде точек красного, темно-красного или черного цвета иногда с тонкими разводами излившейся крови на поверхности слизистой. Гемосидерин же это тёмно-жёлтый пигмент, состоящий из оксида железа. Гемосидерин образуется при распаде гемоглобина и последующей денатурации и депротеинизации белка ферритина, отвечающего за хранение железа в организме». То есть для того чтобы из гемоглобина получился гемосидерин должно пройти определенное время. Типичным примером скопления гемосидерина является цветущий синяк. Еще гемосидерин накапливается в органах и тканях при некоторой патологии связанной с распадом гемоглобина или избыточным поступлением железа в организм. В любом случае это процесс не быстрый.
В желудке же излившаяся кровь практически сразу смывается, редуцируется и предпосылок для образования гемосидерина нет.
Вот тут то и вкралась ошибка. Гемоглобин попадая в желудок взаимодействует с соляной кислотой и образуется стойкое соединение соляно-кислый гематин или просто гематин. Он приобретает черный цвет. Этим обусловлен черный, дегтеобразный цвет стула при кровотечениях. Подозреваю, что когда то, кто то, не специально, а, мягко говоря, по рассеянности принял на вооружение термин гемосидерин при описании геморрагических включений, возможно еще и обучил этому коллег, и понеслось. Да, и замечено, что практикуется это в Москве.
Источник
ГЛАВА 17. БОЛЕЗНИ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНОГО ТРАКТА
БОЛЕЗНИ
ЗЕВА И ГЛОТКИ. БОЛЕЗНИ ЖЕЛУДКА. ИДИОПАТИЧЕСКИЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ КИШЕЧНИКА
(БОЛЕЗНЬ КРОНА И ЯЗВЕННЫЙ КОЛИТ) ЗАБОЛЕВАНИЯ ЧЕРВЕОБРАЗНОГО
ОТРОСТКА СЛЕПОЙ КИШКИ
Ангина (тонзиллит) –
инфекционное заболевание, характеризующееся воспалительными изменениями
лимфоидной ткани глотки и нёбных миндалин (кольца Пирогова). Формы
тонзиллита: острый, хронический (рецидивирующий). Формы острого тонзиллита: экссудативный
– катаральный, фибринозный, гнойный; некротический – некротический,
гангренозный, язвенно-пленчатый (особая форма – ангина
Симановского-Плаута-Венсана); по локализации – лакунарный,
фолликулярный. Осложнения тонзиллита: местные – паратонзиллярный абсцесс, флегмона клетчатки, тромбофлебиты; общие – сепсис, ревматизм, гломерулонефрит.
Гастрит – воспаление слизистой оболочки желудка. Виды гастрита: острый и хронический; по топографии – диффузный и очаговый (антральный, фундальный, пилороантральный, пилородуоденальный).
Формы острого гастрита: катаральный, фибринозный, гнойный (флегмонозный), некротический. При любой форме – эрозии и острые язвы. Эрозия – поверхностный дефект слизистой оболочки не глубже ее мышечной пластинки. Язва – глубокий дефект, дном которого является мышечный или даже серозный слой стенки органа.
Хронический гастрит –
это группа заболеваний желудка разной этиологии, характеризующихся
сочетанием хронического воспаления и нарушения регенерации со
структурной перестройкой слизистой оболочки желудка. Классификация хро-
нического гастрита: по этиологии и патогенезу – хеликобактерный (типа В), аутоиммунный (типа А), рефлюкс-гастрит (типа С); по топографии; по морфологическому типу – поверхностный и атрофический; по активности. Учитывают наличие, характер и степень выраженности кишечной метаплазии и дисплазии (интраэпителиальной неоплазии). Хронический атрофический пангастрит – факультативный предрак.
Язвенная болезнь –
хроническое, циклически текущее заболевание, основным клиническим и
морфологическим проявлением которого является хроническая рецидивирующая
язва желудка или двенадцатиперстной кишки. Осложнения язвенной болезни: деструктивные –
кровотечения, перфорация (прободение с развитием перитонита),
пенетрация (в печень, желчный пузырь, сальник, поджелудочную железу); рубцовые – деформация и стеноз входного и выходного отделов желудка и луковицы двенадцатиперстной кишки; малигнизация – озлокачествление (крайне редко).
Опухоли желудка: эпителиальные (аденома и рак) и неэпителиальные (мезенхимальные,
лимфомы). Макроскопически экзофитные образования желудка
(гиперпластические разрастания, аденомы) принято называть полипами. Классификация рака желудка: по макроскопической форме роста – экзофитный (полипозный, грибовидный, блюдцеобразный), эндофитный (бляшковидный), язвенно-инфильтративный, пластический линит; по
гистологическому типу – кишечного типа (интестинальный – виды аденокарцином и др.) и диффузный (скирр, солидный, перстневидно-клеточный и т.д.); по глубине инвазии и стадии генерализации опухолевого процесса (система TNM). Диагностически значимые лимфогенные метастазы: в левый надключичный лимфатический узел (метастаз Вирхова), ретроградно – в яичники (рак Крукенберга), в параректальную клетчатку (метастазы Шницлера).
Идиопатические заболевания кишечника: болезнь Крона (гранулематозное воспаление любого отдела пищеварительного тракта) и язвенный колит. Язвенный колит – факультативное предраковое заболевание.
Аппендицит –
воспаление червеобразного отростка слепой кишки. В хирургической
практике входит в группу заболеваний, обозначаемых как острый живот
(язвенная болезнь с перфорацией, язвенная болезнь с кровотечением,
острая кишечная непроходимость, ущемленная грыжа, острый холецистит,
острый аппендицит). Формы аппендцита: острый
– простой, поверхностный, флегмонозный (варианты – апостематозный,
флегмонозно-язвенный), гангренозный (первичный и вторичный);
хронический. Осложнения острого аппендицита: перитонит, мезентериолит, пилефлебит, пилефлебитические абсцессы печени.
Рис. 17-1. Микропрепарат.
Хронический тонзиллит в стадии обострения: поверхностный эпителий
поврежден (дистрофические и некротические изменения, участки
изъязвлений), инфильтрирован нейтрофильными лейкоцитами (1). Лимфоидные
фолликулы атрофированы, в строме склероз (2). В расширенных лакунах
определяются нейтрофильные лейкоциты и колонии бактерий (3).
Окраска гематоксилином и эозином: х160
Рис. 17-2. Макропрепараты
(а, б). Хронический мультифокальный атрофический гастрит: слизистая
оболочка желудка со сглаженными складками, истончена, бледная,
сероватого цвета, с мелкоточечными кровоизлияниями, эрозиями (б –
препарат И.Н. Шестаковой)
Рис. 17-3. Микропрепараты
(а-г). Хронический атрофический гастрит: слизистая оболочка фундального
отдела желудка резко истончена, железы уменьшены в размерах, расстояние
между ними увеличено, эпителий желез приобретает более примитивные
черты, теряет способность вырабатывать желудочный сок и соляную кислоту,
секретирует слизь. Встречаются фокусы кишечной метаплазии с
бокаловидными клетками (1). В собственной пластинке слизистой оболочки
диффузный лимфоплазмоцитарный инфильтрат, лимфоидные фолликулы (2),
выраженный склероз; в, г – Helicobacter pilori в просвете желез.
а,
б – окраска гематоксилином и эозином, в – окраска по Вартин-Стари, г –
иммуногистохимический метод: а – x 100, б – x200, в, г – x400
Рис. 17-4. Макропрепараты
(а-д). Острые эрозии и язвы желудка: в слизистой оболочке желудка
множественные небольшие поверхностные (эрозии) и более глубокие,
захватывающие подслизистый и мышечный слои стенки желудка (острые язвы),
дефекты округлой формы с мягкими ровными краями и дном
коричневато-черного или серо-черного цвета (за счет солянокислого
гематина, который образуется из гемоглобина эритроцитов под действием
соляной кислоты и ферментов желудочного сока); (см. также рис. 3-4,
4-10) (а, в – препараты И.Н. Шестаковой, г, д – препараты Н.О. Крюкова)
Рис. 17-4. Продолжение
Рис. 17-4. Окончание
Рис. 17-5. Микропрепараты
(а, б). Эрозии слизистой оболочки желудка: в слизистой оболочке желудка
определяется поверхностный (в пределах слизистой оболочки) очаг некроза
с формированием неглубокого дефекта – эрозии с перифокальной
лейкоцитарной воспалительной инфильтрацией. В дне эрозии отложения
солянокислого гематина (1). Окраска гематоксилином и эозином: x 100 (б –
препарат Н.О. Крюкова)
Рис. 17-6. Макропрепараты
(а-н). Хроническая язва желудка (а, в-д, ж-н) и двенадцатиперстной
кишки (б, е): хронические язвы с кровотечением – аррозированные и
тромбированные сосуды в дне язв (в, е, л, н), перфорацией (д, к – вид
снаружи, со стороны брюшной полости – к) и пенетрацией (б, г, ж-и, н).
Округлой формы дефекты слизистой оболочки и стенки желудка (или
двенадцатиперстной кишки) с валикообразными уплотненными краями.
Кардиальный край язвы подрыт, нависает, а край, обращенный к
пилорическому отделу желудка, – пологий, имеет вид террасы, ступени
которой образованы слизистой оболочкой, подслизистым и мышечным слоями.
Такая конфигурация обусловлена постоянным смещением краев язвы при
перистальтике. Слизистая оболочка вокруг язвы изменена, складки ее могут
располагаться радиально по отношению к язвенному дефекту (конвергенция
складок –
а, ж, и, м); (а-в, е – препараты И.Н. Шестаковой,
б, г, и-н, – препараты Н.О. Крюкова)
Рис. 17-6. Продолжение
Рис. 17-6. Продолжение
Рис. 17-6. Продолжение
Рис. 17-6. Продолжение
Рис. 17-6. Окончание
Рис. 17-7. Микропрепараты
(а, б). Хроническая язва желудка (а) и двенадцатиперстной кишки (б):
дефект стенки желудка или двенадцатиперстной кишки, захватывающий
слизистую, подслизистую и мышечную оболочку. В дне дефекта 4 слоя: 1 –
фибринозно-гнойный экссудат; 2 – фибриноидный некроз; 3 – грануляционная
ткань; 4 – рубцовая ткань со склерозированными и гиалинизированными
сосудами. В краях хронической язвы желудка процессы перестройки эпителия
(гиперплазия шеечного эпителия, атрофия желез, кишечная метаплазия,
слабая или умеренная дисплазия). Окраска гематоксилином и эозином: а – x
120, б – x60 (б – препарат Н.О. Крюкова)
Рис. 17-8. Макропрепараты
(а, б). Полип желудка: выступающее в просвет желудка небольшое
экзофитное образование на широком основании, покрытое слизистой
оболочкой (гистологически: а – аденома, б – лейомиома); (а – препарат
Н.О. Крюкова, б – препарат И.Н. Шестаковой)
Рис. 17-9. Макропрепараты
(а-г). Рак желудка (узловатая или диффузная формы): а – фунгозный, б –
блюдцеобразный, в, г – эндофитный диффузный рак (г – вид снаружи
желудка, со стороны серозной оболочки); узловатая форма – на малой
кривизне желудка определяется крупный узел грибовидной или
блюдцеобразной формы с приподнятыми неровными краями и опущенным
изъязвленным дном. Ткань узла белесоватого цвета, плотной консистенции,
прорастает все слои стенки желудка, не имеет четких границ. Диффузная
форма: стенка желудка на значительном протяжении резко утолщена за счет
разрастания плотной белесоватой ткани, не имеющей четких границ.
Слизистая оболочка со сглаженными складками, ригидна (см. также рис.
9-5, 10-7); (а – препарат Н.О. Крюкова, б – препарат И.Н. Шестаковой)
Рис. 17-9. Окончание
Рис. 17-10. Микропрепараты
(а, б). Аденокарцинома желудка: в толще слизистой оболочки и мышечного
слоя желудка располагаются атипичные, разных размеров и формы железистые
комплексы (тканевая атипия). Опухолевые клетки и их ядра полиморфны,
разных размеров и формы, ядра гиперхромны (клеточная атипия). Митозы
(типичные и атипичные) немногочисленны, уровень пролиферативной
активности опухоли умеренный. Опухолевые комплексы проникают в
собственную пластинку и мышечный слой – инвазивный рост (см. также рис.
9-6). Окраска гематоксилином и эозином: x 160
Рис. 17-11. Макропрепарат.
Флегмонозный аппендицит: червеобразный отросток увеличен в размерах,
стенки утолщены, диффузно пропитаны гноем (при надавливании из просвета
отростка также выделяется гной), поверхность тусклая,
красновато-синюшная, с полнокровными сосудами; брыжеечка отростка также
полнокровная, с очагами нагноения, кровоизлияний (см. также рис. 6-6);
(препарат И.Н. Шестаковой)
Рис. 17-12. Микропрепараты
(а, б). Флегмонозно-язвенный аппендицит: выраженная лейкоцитарная
инфильтрация всех слоев стенки аппендикса, отек, воспалительная
гиперемия, некроз и изъязвление слизистой оболочки, атрофия лимфоидной
ткани.
Окраска гематоксилином и эозином: а – x 60, б – x200
Рис. 17-13. Макропрепарат.
Хронический аппендицит: червеобразный отросток обычных размеров (но
может быть увеличен или уменьшен), серозная оболочка гладкая, блестящая,
белесоватая, с обрывками спаек. Стенка отростка утолщена, уплотнена
(склероз). Слизистая оболочка бледно-розового цвета (атрофия). Просвет
отростка местами облитерирован
Рис. 17-14. Микропрепараты
(а, б). Болезнь Крона: глубокий щелевидный язвенный дефект слизистой
оболочки, лимфомакрофагальная, с примесью плазмоцитов инфильтрация и
склероз всех слоев стенки кишки (а), гранулема с гигантскими
многоядерными клетками в подслизистом слое (б). Окраска гематоксилином и
эозином: а – x 100, б – x200
Рис. 17-15. Микропрепарты
(а, б). Язвенный колит: выраженный диффузный лимфомакрофагальный с
примесью лейкоцитов воспалительный инфильтрат, отек, микроциркуляторные
расстройства слизистой оболочки толстой кишки, крипт-абсцесс (1).
Окраска гематоксилином и эозином: а – x 100, б – x200
Рис. 17-16. Макропрепараты
(а, б). Гангрена кишки: ишемический некроз части тонкой или толстой
кишки при обструкции мезентериальных артерий тромбами, тромбоэмболами,
атеросклеротическими бляшками (острая ишемическая болезнь кишечника); (а
– препарат А.Н. Кузина и Б.А. Колонтарева)
Рис. 17-17. Макропрепараты
(а, б). Дивертикулез толстой кишки: множественные пальцевидные
выпячивания в стенке толстой кишки, со стороны слизистой оболочки входы в
дивертикулы имеют вид темных пятен (стрелки); (препараты И.Н.
Шестаковой)
Рис. 17-18. Макропрепарат. Дивертикул Меккеля (препарат И.Н. Шестаковой)
Рис. 17-19. Пупочная ущемленная грыжа: гангрена петли тонкой кишки в грыжевом мешке
Рис. 17-20. Разлитой
фибринозно-гнойный перитонит: петли кишок раздуты (парез кишечника,
динамическая кишечная непроходимость), на брюшине массивные
фибринозно-гнойные наложения (препарат И.Н. Шестаковой)
Рис. 17-21. Канцероматоз брюшины (а) и метастазы рака толстой кишки в брыжеечные лимфатически узлы (б) (препараты И.Н. Шестаковой)
Рис. 17-22. Макропрепараты
(а, б). Рак толстой кишки: а – экзофитный полиповидный; б – циркулярный
изъязвленный рак со стенозом просвета кишки (кишечной непроходимостью);
(а – препарат И.Н. Шестаковой)
Рис. 17-23. Макропрепарат
(а) и микропрепараты (б, в). Гастроинтестинальная стромальная опухоль
(ГИСТ): а – множественные узлы опухоли в брыжейке и стенке тонкой кишки,
б – веретеноклеточный вариант ГИСТ, в – экспрессия специфического
диагностического маркера ГИСТ – антигена CD117. б – окраска
гематоксилином и эозином, в – иммуногистохимический метод; х200
Источник
Гемоглобиногенные пигменты (гематоидин)
Гематоидин — кристаллический не содержащий железа пигмент, имеющий вид ярко-оранжевых ромбических пластинок или иголок, реже зерен.
Эрозии желудка и двенадцатиперстной кишки
Он возникает при распаде эритроцитов и гемоглобина внутриклеточно, но в отличие от гемосидерина в клетках не остается и при гибели их оказывается свободно лежащим среди масс распада. Химически он идентичен билирубину. Образуется гематоидин в старых гематомах, рубцующихся инфарктах, причем его находят в центральных участках кровоизлияния вдали от живых тканей.
Гематины представляют собой окисленную форму гема и возникают при гидролизе оксигемоглобина. Они имеют вид темно-коричневых или черных ромбовидных кристаллов или зерен, дают двойное лучепреломление в поляризованном свете (анизотропны), содержат железо, но в связанном состоянии, растворимы в щелочах, малорастворимы в кислотах, обесцвечиваются перекисью водорода.
К выявляемым в тканях гематинам относят: малярийный пигмент (гемомеланин), солянокислый гематин (гемин) и формалиновый пигмент. Гистохимические свойства этих пигментов идентичны. Малярийный пигмент, (гемомеланин) возникает из простетической части гемоглобина под влиянием плазмодиев малярии, паразитирующих в эритроцитах.
Отщепление глобина сопровождается окислением гема и образованием внутри плазмодия пигмента в виде черно-бурых зерен. При разрушении эритроцитов малярийный пигмент попадает в кровь и подвергается фагоцитозу элементами ретикулоэндотелиальной системы. Селезенка, печень, костный мозг, лимфатические узлы, головной мозг (при малярийной коме) приобретают вследствие этого серо-аспидную окраску. В тех же органах наряду с малярийным пигментом наблюдается отложение гемосидерина.
Солянокислый гематин (гемин) образуется в эрозиях и язвах желудка под воздействием на гемоглобин ферментов желудочного сока и соляной кислоты. Область дефекта слизистой оболочки желудка приобретает буро-черный цвет. Кристаллы солянокислого гематина в поляризованном свете дают явления анизотропии и дихроизма. Формалиновый пигмент в виде темно-коричневых игл или гранул встречается в тканях при фиксации их в кислом формалине (формалиновый пигмент не образуется, если формалин имеет рН больше 6,0). Его считают производным гематина.
«Патологическая анатомия», А.И.Струков
Популярные статьи раздела
ГИСТОХИМИЯ ПИГМЕНТОВ
Термин «пигменты» охватывает группу веществ, поглощающих свет в видимом спектре и наблюдаемых в неокрашенных клетках и тканях. Под это определение подходят вещества различного происхождения, состава и функционального назначения. По происхождению пигменты можно разделить на экзогенные (в частности, угольная или известковая пыль, отложения металлов, химиотерапевтических веществ и др.) и эндогенные. Эндогенные пигменты разделяют на гематогенные (например, гемоглобин и его производные) и негематогенные, или аутогенные (например, меланин и жировые пигменты — липофусцины и каротиноиды).
В гистохимическом отношении пигменты мало различаются. Несмотря на то, что химический состав ряда пигментов выяснен не до конца, гистохимически их можно выявить с достаточно высокой степенью надежности, тем более что большинство из них имеет характерную тканевую локализацию.
Выявление гемосидерина и гемоглобина
Гемосидерин — железосодержащий пигмент, образующийся из гемоглобина в результате внутриклеточных превращений.
Для выявления гемоглобина пригодна реакция псевдопероксидазы с бензидином, а идентификация гемосидерина основана на определении содержащегося в нем железа с помощью реакции Перлса с кислым ферроцианидом.
Кроме того, гемосидерин дает положительную ШИК-реакцию, обусловленную его нахождением в белково-полисахаридном комплексе. Резко положительна реакция этого комплекса с тетразолием после бензотирования.
Выявление гемоглобина бензидином по Пикворту
1. Материал фиксируют в формалине, заливают в парафин.
2. Депарафинированные срезы доводят до воды.
3. Промывают в метаноле.
4. Перевернутое стекло со срезом помещают в раствор бензидина (0,2 г бензидина и маленький кристаллик нитропруссида натрия растворяют в 15 мл метанола, добавляют 4 капли ледяной уксусной кислоты и встряхивают) в чашке для окрашивания на 5-10 мин.
5. Смывают бензидин озонированным эфиром (50 мл 3 % перекиси водорода, 100 мл метанола и 50 мл эфира).
6. Помещают срез на 10 мин в свежую порцию озонированного эфира.
7. Промывают в проточной воде 10-15 мин.
8. Докрашивают ядра в 1% водном растворе нейтрального красного 3 мин.
9. Промывают, обезвоживают в спиртах, просветляют в ксилоле и заключают в дистрен-дибутил-ксилол.
Результат:
гемоглобин и некоторые «оксидазные» гранулы лейкоцитов окрашиваются в темно-синий цвет, ядра — в красный.
Трехцветный метод выявления билирубина, гемосидерина и липофусцина
по Гпеннеру
1. Срезы толщиной 10 мкм готовят в криостате, наклеивают на стекла и подсушивают при комнатной температуре.
2. Погружают на 5 мин в 2 % раствор гексацианоферрата калия.
3. Обрабатывают 20 мин свежеприготовленной смесью равных частей 2 % гексацианоферрата калия и 5 % уксусной кислоты.
4. Ополаскивают в проточной воде и обрабатывают в течение 15 мин 3 % раствором бихромата калия с рН 2,2.
5. Промывают в воде.
6. Окрашивают свежепрофильтрованным раствором жирового красного-О в изопропаноле 20мин.
7. Промывают в проточной воде в течение 5 мин.
8. Заключают в сироп Апати.
Результат:
липофусцины окрашиваются в оранжево-красный цвет,
гемосидерин — в синий,
билирубин — в темный изумрудно-зеленый.
Примечание.
Гемосидерин растворяется в кислотах, поэтому для его выявления не следует применять кислые фиксаторы .
Выявление желчных пигментов
Желчные пигменты, как и гемосидерин, являются продуктом разложения гемоглобина и других железосодержащих белков. Основные желчные пигменты — билирубин и биливердин — обладают кислотными свойствами и образуют со щелочноземельными металлами соли, не растворимые в воде. Их идентификация возможна с помощью окраски метиленовым синим, реакций Гмелина и Штейна. Реакция Гмелина основана на окислении билирубина азотной кислотой, а реакция Штейна — на окислении его йодом. Метод Штейна позволяет выявить все желчные пигменты.
Реакция с йодом на желчные пигменты по Штейну
1. Материал фиксируют в формалине или спирте, заливают в парафин.
2. Депарафинированные срезы доводят до воды.
3. Обрабатывают 12 — 18 ч йодным реактивом
(2 части раствора Люголя и 1 часть 10 % раствора йода на 96 % спирте).
4. Промывают в проточной воде 5 мин.
5. Обесцвечивают 5 % раствором тиосульфата натрия 30 с.
6. Промывают и докрашивают квасцовым кармином Майера 3-18 ч.
7. Промывают в воде, обезвоживают абсолютным ацетоном, просветляют в ксилоле и заключают в бальзам.
Результат:
желчные пигменты окрашиваются в темно-зеленый цвет,
ядра—в красный.
Выявление меланина
Меланин имеет сложную полимерную структуру и обычно окрашен в черно-коричневый цвет, хотя имеются и другие оттенки — до желтого и даже фиолетового. Как правило, он встречается в форме гранул — меланосом — в клетках тканей эктодермального происхождения — в эпидермисе, волосах, волосяных фолликулах, меланомах кожи, пигментном эпителии радужки, сетчатке. В нервной системе присутствует разновидность меланина — нейромеланин.
Меланин синтезируется в промеланосомах через окисление тирозина до ДОФА при участии тирозиназы и пероксидазы. На этом основаны методы специфического контрастирования и электронно-микроскопического гистохимического выявления промеланосом по положительной реакции на тирозиназу.
Выявление меланина основано на его способности образовывать комплексы с ионами двухвалентного железа, которые легко обнаруживаются гексацианоферратом калия в реакции турнбулевой сини. На этом принципе основан метод Лилли.
«Железный» метод выявления меланина
по Лилли
1. Материал фиксируют в различных смесях, заливают в парафин.
2. Депарафинированные срезы доводят до воды.
3. Помещают в 2,5 % раствор сульфата железа гептагидрата на 60 мин.
4. Промывают в 4 сменах дистиллированной воды по 5 мин.
5. Помещают в 1 % раствор гексацианоферрита (III) калия в 1 % уксусной кислоте на 30 мин.
6. Промывают в 1 % уксусной кислоте.
7. При желании докрашивают пикрофуксином по Ван-Гизону.
8. Проводят через спирт возрастающей концентрации и ксилол, заключают в бальзам.
Результат:
меланин окрашивается в темно-зеленый цвет на бесцветном фоне; такой же цвет имеет гемосидерин.
Меланин, как и липофусцин, обладает способностью восстанавливать раствор аммиачного серебра. На этом основан принцип электронно-микроскопического гистохимического выявления промеланосом и меланосом по Мисиме. Раздельное выявление меланина и липофусцина возможно по их разному окрашиванию нильским синим. Кроме того, липофусцин в отличие от меланина дает видимую собственную флюоресценцию в ультрафиолетовом свете.
Импрегнация серебром промеланосом и меланосом
по Мисиме
1. Маленькие кусочки ткани фиксируют в 10 % формальдегиде на фосфатном буфере (рН 7,4) в течение 1 ч при 4 “С.
2. Тщательно промывают в дистиллированной воде.
3. Инкубируют в растворе аммиачного серебра 40 — 60 мин при 58 °С.
4. Промывают в нескольких сменах дистиллированной воды.
5. Кусочки ткани помещают на 1 —2 мин в раствор трихлорида золота (5 мл 6 % тиосульфата натрия смешивают с 5 мл 6 % тиоцианата аммония и добавляют по каплям 2 % раствор трихлорида золота до образования розовато-красного осадка).
6. Кусочки ткани помещают сразу в 0,6 % раствор тиосульфата натрия на 8 мин.
7. Тщательно промывают в дистиллированной воде.
8. Дополнительно фиксируют в 0,6 % забуференном растворе перманганата калия или в 1 % забуференном растворе тетраоксида осмия (рН 7,4) 1 ч при 4 “С.
9. Обезвоживают и заливают.
Результат:
серебрятся меланосомы и премеланосомы.
Гранулярные отложения металлического серебра выявляются и в тех премеланосомах, в которых меланин не образуется (у альбиносов).
Выявление липофусцина и меланина с применением нильского синего
по Лилли
1. Материал фиксируют в любом фиксаторе, заливают в парафин.
2. Депарафинированные среды доводят до воды.
3. Окрашивают в течение 20 мин 0,05 % раствором нильского синего А в 1 % серной кислоте.
4. Промывают в проточной воде 10 — 20 мин.
5. Можно также быстро ополоснуть в 1 % растворе серной кислоты и обезводить в 4 порциях абсолютного ацетона.
6. Заключают после п. 3 в глицерин-желатин или после п. 4 проводят через ксилол и заключают в синтетическую среду.
Результат:
если обработка включала пп. 4 и 6, то липофусцины окрашиваются в темно-синий или зеленый цвет, меланин -в темно-зеленый; при обработке с включением пп. 5 и б меланин окрашивается в темно-зеленый цвет, а липофусцины сохраняют свою первоначальную окраску.
Метод дифференцировки меланина от липофусцина
по Хуэку
1. Материал фиксируют в любом фиксаторе, заливают в парафин.
2. Депарафинированные срезы помещают в дистиллированную воду.
3. Срезы окрашивают свежеприготовленным насыщенным водным раствором нильского синего 30мин.
4. Промывают в дистиллированной воде.
5. Обесцвечивают 10 % перекисью водорода 24 ч.
6. Промывают в проточной воде.
7. Заключают в глицерин-желатин.
Результат:
липофусцин окрашивается в синий цвет,
меланин в р?